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網站首頁技術支持 ◇ 可以通過哪些方式延長液相色譜柱的壽命
可以通過哪些方式延長液相色譜柱的壽命
  • 更新日期:2025-05-22     信息來源:本站      瀏覽次數:814
    •   液相色譜柱是高效液相色譜(HPLC)系統的核心部件,其性能直接影響分離效果和實驗結果的準確性。色譜柱價格昂貴且易受損傷,因此科學養護至關重要。以下是從使用前準備、流動相管理、樣品處理到日常維護的全流程養護細節,旨在延長色譜柱壽命并保障數據可靠性。
        一、使用前準備與安裝
        1. 檢查柱狀態
        - 新柱或久存柱需用配套溶劑(如甲醇或乙腈)沖洗10-20倍柱體積,置換存儲溶劑并排除氣泡。
        - 觀察柱入口篩板是否清潔,避免固體顆粒堵塞。
        2. 正確安裝
        - 確保柱方向與流動相流向一致(通常標記為“→”)。
        - 使用專用接頭,避免螺紋過度擰緊導致柱體變形。
        二、流動相的管理
        1. 溶劑純度與過濾
        - 流動相需采用HPLC級溶劑,水相需經0.45μm濾膜過濾并超聲脫氣。
        - 緩沖鹽應現配現用,避免微生物滋生或沉淀生成。
        2. pH值控制
        - 反相柱(如C18柱)流動相pH范圍通常為2-8,pH(如強酸性或堿性)會溶解固定相硅膠基質。
        - 正相柱(如硅膠柱)避免高水相比例,防止硅膠水解。
        3. 梯度洗脫后處理
        - 完成梯度洗脫后,需用初始溶劑(如甲醇-水)平衡15-30分鐘,清除強保留組分。
        - 若使用高比例有機溶劑(如純乙腈),結束后需切換至低濃度有機相過渡,防止固定相塌陷。
        三、樣品處理與進樣規范
        1. 樣品前處理
        - 樣品需經0.22μm濾膜過濾或離心(10,000rpm以上),去除顆粒物。
        - 樣品濃度適中,避免過載(通常單次進樣量不超過柱容量的1%-5%)。
        2. 進樣方式優化
        - 自動進樣器需定期清洗進樣針,避免交叉污染。
        - 手動進樣時避免氣泡引入,進樣速度均勻。
        3. 避免強吸附樣品
        - 離子型或極性大分子易吸附在固定相表面,導致柱效下降。可通過添加離子對試劑(如TFA)或調整流動相極性改善。
        四、操作條件控制
        1. 流速與壓力限制
        - 嚴格遵守色譜柱額定流速(如C18柱通常為0.5-1.5mL/min),超限會加速篩板損壞。
        - 柱壓突然升高可能由堵塞或顆粒物引起,需立即停機排查。
        2. 溫度穩定性
        - 恒溫控制(通常25-30℃)可減少流動相黏度波動,提升保留時間重現性。
        - 避免柱溫驟變,防止固定相結構破壞。
        五、日常維護與存儲
        1. 沖洗與再生
        - 每日使用后用低粘度溶劑(如甲醇或乙腈-水)沖洗30分鐘,清除殘留物質。
        - 若柱效下降,可用異丙醇或四氫呋喃反向沖洗再生(需參考柱說明書)。
        2. 長期存儲
        - 反相柱:存儲于甲醇-水(如50:50)或純甲醇中,避免純水導致硅膠干燥開裂。
        - 正相柱/HILIC柱:存儲于正己烷或乙腈-水(含少量甲醇防霉)。
        - 密封兩端,存放于陰涼避光處(如冰箱)。
        3. 記錄與追蹤
        - 記錄柱批次號、使用次數、樣品類型及柱壓變化,便于追溯性能衰減原因。
        六、常見問題與應急處理
        1. 柱效下降
        - 可能原因:樣品污染、固定相流失或篩板堵塞。
        - 處理:反向沖洗、更換篩板或再生色譜柱。
        2. 鬼峰與基線漂移
        - 可能原因:流動相不純或緩沖鹽析出。
        - 處理:更換新鮮溶劑并沖洗系統。
        3. 柱壓過高
        - 可能原因:顆粒堵塞或柱床干涸。
        - 處理:反向沖洗或拆卸檢查篩板。

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